RNA類文庫取樣要求
RNA類文庫取樣要求 （版本：2025年01月）
A、RNA類文庫取樣要求
1. 常規(guī)m6A RNA甲基化測序（MeRIP）
提取的RNA樣品：
(1) 提取的總RNA Qubit檢測總量不低于75μg，濃度正?！?50ng/ul；
(2) 電泳檢測具有明顯的18S或28S主帶，且條帶清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通過干冰寄送。
動物組織樣品：
(1) 優(yōu)先選用新鮮采集的樣本，液氮或-80℃凍存的組織，凍存期間避免反復(fù)凍融；組織量推薦不小于50mg；
(2) 組織離體后，用PBS或生理鹽水快速漂洗，去除殘留血液，血管或結(jié)締組織后，馬上進(jìn)行液氮萃凍，后轉(zhuǎn)入凍存管液氮或-80℃保存；或?qū)⒔M織切成小片后，在含有RNA later的凍存管中液氮或-80℃保存；
植物組織樣品：
(1) 植物組織樣本建議送樣量≥500mg。盡量選取新鮮、幼嫩、生長 旺盛的組織部位；
(2) 準(zhǔn)確取得所需組織后，用清水清洗干凈表面的灰塵及泥土，立即放入事先標(biāo)記好的凍存管中，或者用錫箔紙包裹好做好標(biāo)記；
(3) 立即投入液氮中萃凍，后進(jìn)行液氮或-80℃冰箱保存；
培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 貼壁細(xì)胞，細(xì)胞生長至對數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型，去除細(xì)胞培養(yǎng)基，PBS漂洗細(xì)胞2-3次，最后一次將PBS去除干凈，（一定要去除干凈，殘留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器輕輕吹打，用Trizol將細(xì)胞裂解下來，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的7次方左右；
(2) 懸浮細(xì)胞，細(xì)胞生長至對數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型后，收集細(xì)胞，用PBS洗滌1-2次，最后一次離心后，去除干凈PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速將細(xì)胞重懸，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的7次方左右；
(3) 干冰寄送。
2. 常規(guī) m5C/m1A/m7G/ac4C RNA 修飾測序（RIP）
提取的RNA樣品：
(1) 提取的總 RNA Qubit 檢測總量不低于 100μg，濃度正?！?ug/ul；
(2) 電泳檢測具有明顯的18S或28S主帶，且條帶清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通過干冰寄送。
動物組織樣品：
(1) 優(yōu)先選用新鮮采集的樣本，液氮或-80℃凍存的組織，凍存期間避免反復(fù)凍融；組織量推薦不小于100mg；
(2) 組織離體后，用PBS 或生理鹽水快速漂洗，去除殘留血液，血管或結(jié)締組織后，馬上進(jìn)行液氮萃凍，后轉(zhuǎn)入凍存管液氮或-80℃保存；或?qū)⒔M織切成小片后，在含有RNA later的凍存管中液氮或-80℃保存；
植物組織樣品：
(1) 植物組織樣本建議送樣量≥600mg。盡量選取新鮮、幼嫩、生長 旺盛的組織部位；
(2) 準(zhǔn)確取得所需組織后，用清水清洗干凈表面的灰塵及泥土，立即放入事先標(biāo)記好的凍存管中，或者用錫箔紙包裹好做好標(biāo)記；
(3) 立即投入液氮中萃凍，后進(jìn)行液氮或-80℃冰箱保存；
培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 貼壁細(xì)胞，細(xì)胞生長至對數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型，去除細(xì)胞培養(yǎng)基，PBS漂洗細(xì)胞2-3次，最后一次將PBS去除干凈，（一定要去除干凈，殘留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器輕輕吹打，用Trizol將細(xì)胞裂解下來，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的7次方左右；
(2) 懸浮細(xì)胞，細(xì)胞生長至對數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型后，收集細(xì)胞，用PBS洗滌1-2次，最后一次離心后，去除干凈PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速將細(xì)胞重懸，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的7次方左右；
(3) 干冰寄送。
3. 常規(guī) m5C RNA 甲基化測序（RNA-Bis）
提取的RNA樣品：
(1) 提取的總 RNA Qubit 檢測總量不低于 50μg，濃度正?！?00ng/ul；
(2) 電泳檢測具有明顯的18S或28S主帶，且條帶清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通過干冰寄送。
動物組織樣品：
(1) 優(yōu)先選用新鮮采集的樣本，液氮或-80℃凍存的組織，凍存期間避免反復(fù)凍融；組織量推薦不小于30mg；
(2) 組織離體后，用PBS 或生理鹽水快速漂洗，去除殘留血液，血管或結(jié)締組織后，馬上進(jìn)行液氮萃凍，后轉(zhuǎn)入凍存管液氮或-80℃保存；或?qū)⒔M織切成小片后，在含有RNA later的凍存管中液氮或-80℃保存；
植物組織樣品：
(1) 植物組織樣本建議送樣量≥300mg。盡量選取新鮮、幼嫩、生長 旺盛的組織部位；
(2) 準(zhǔn)確取得所需組織后，用清水清洗干凈表面的灰塵及泥土，立即放入事先標(biāo)記好的凍存管中，或者用錫箔紙包裹好做好標(biāo)記；
(3) 立即投入液氮中萃凍，后進(jìn)行液氮或-80℃冰箱保存；
培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 貼壁細(xì)胞，細(xì)胞生長至對數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型，去除細(xì)胞培養(yǎng)基，PBS漂洗細(xì)胞2-3次，最后一次將PBS去除干凈，（一定要去除干凈，殘留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器輕輕吹打，用Trizol將細(xì)胞裂解下來，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個樣本細(xì)胞數(shù)量建議5X10的6次方左右；
(2) 懸浮細(xì)胞，細(xì)胞生長至對數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型后，收集細(xì)胞，用PBS洗滌1-2次，最后一次離心后，去除干凈PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速將細(xì)胞重懸，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個樣本細(xì)胞數(shù)量建議5X10的6次方左右；
(3) 干冰寄送。
4. 微量（m6A） RNA甲基化測序（MeRIP）
提取的RNA樣品：
(1) 提取的總 RNA Qubit 檢測總量不低于 10μg，濃度正?！?00ng/ul；
(2) 電泳檢測具有明顯的18S或28S主帶，且條帶清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通過干冰寄送。
動物組織樣品：
(1) 優(yōu)先選用新鮮采集的樣本，液氮或-80℃凍存的組織，凍存期間避免反復(fù)凍融；組織量推薦不小于30mg；
(2) 組織離體后，用PBS 或生理鹽水快速漂洗，去除殘留血液，血管或結(jié)締組織后，馬上進(jìn)行液氮萃凍，后轉(zhuǎn)入凍存管液氮或-80℃保存；或?qū)⒔M織切成小片后，在含有RNA later的凍存管中液氮或-80℃保存；
植物組織樣品：
(1) 植物組織樣本建議送樣量≥100mg。盡量選取新鮮、幼嫩、生長 旺盛的組織部位；
(2) 準(zhǔn)確取得所需組織后，用清水清洗干凈表面的灰塵及泥土，立即放入事先標(biāo)記好的凍存管中，或者用錫箔紙包裹好做好標(biāo)記；
(3) 立即投入液氮中萃凍，后進(jìn)行液氮或-80℃冰箱保存；
培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 貼壁細(xì)胞，細(xì)胞生長至對數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型，去除細(xì)胞培養(yǎng)基，PBS漂洗細(xì)胞2-3次，最后一次將PBS去除干凈，（一定要去除干凈，殘留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器輕輕吹打，用Trizol將細(xì)胞裂解下來，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的6次方左右；
(2) 懸浮細(xì)胞，細(xì)胞生長至對數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型后，收集細(xì)胞，用PBS洗滌1-2次，最后一次離心后，去除干凈PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速將細(xì)胞重懸，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的6次方左右；
(3) 干冰寄送。
5. 微量（m7G/ac4C/m1A）RNA 甲基化測序（RIP）
提取的RNA樣品：
(1) 提取的總 RNA Qubit 檢測總量不低于 30μg，濃度正?！?00ng/ul；
(2) 電泳檢測具有明顯的18S或28S主帶，且條帶清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通過干冰寄送。
動物組織樣品：
(1) 優(yōu)先選用新鮮采集的樣本，液氮或-80℃凍存的組織，凍存期間避免反復(fù)凍融；組織量推薦不小于40mg；
(2) 組織離體后，用PBS 或生理鹽水快速漂洗，去除殘留血液，血管或結(jié)締組織后，馬上進(jìn)行液氮萃凍，后轉(zhuǎn)入凍存管液氮或-80℃保存；或?qū)⒔M織切成小片后，在含有RNA later的凍存管中液氮或-80℃保存；
植物組織樣品：
(1) 植物組織樣本建議送樣量≥400mg。盡量選取新鮮、幼嫩、生長 旺盛的組織部位；
(2) 準(zhǔn)確取得所需組織后，用清水清洗干凈表面的灰塵及泥土，立即放入事先標(biāo)記好的凍存管中，或者用錫箔紙包裹好做好標(biāo)記；
(3) 立即投入液氮中萃凍，后進(jìn)行液氮或-80℃冰箱保存；
培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 貼壁細(xì)胞，細(xì)胞生長至對數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型，去除細(xì)胞培養(yǎng)基，PBS漂洗細(xì)胞2-3次，最后一次將PBS去除干凈，（一定要去除干凈，殘留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器輕輕吹打，用Trizol將細(xì)胞裂解下來，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的6次方左右；
(2) 懸浮細(xì)胞，細(xì)胞生長至對數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型后，收集細(xì)胞，用PBS洗滌1-2次，最后一次離心后，去除干凈PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速將細(xì)胞重懸，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的6次方左右；
(3) 干冰寄送。
